Question

【題目】圖一為含有目的基因的DNA（外源DNA），圖二為某質粒，表中是幾種限制酶識別序列及其切割位點。用圖中的外源DNA與質粒構建重組質粒。請根據(jù)上述信息分析回答：

限制酶	BamⅠ	SmaⅠ	EcoRⅠ	HinRⅢ
識別序列及切割位點

【1】外源DNA有_____個游離的磷酸基團。

【2】DNA分子的一條多核苷酸鏈中，兩個脫氧核苷酸之間以_____和_____相連。用SmaⅠ限制酶切割外源DNA，切開的是_____和_____之間相連的鍵。

【3】如果用SmaⅠ酶切割外源DNA和質粒來重組質粒，其結果是_____。

【4】如果使用EcoRⅠ酶切割外源DNA和質粒，將目的基因片段與切割后的質�；旌希�加入_____酶，獲得的環(huán)狀DNA可能有哪幾種情況？_____。

【5】如果使用BamHⅠ和HinRⅢ兩種限制酶同時處理外源DNA和質粒，比用EcoRⅠ酶切割的優(yōu)點是_____。

【6】將重組質粒導入大腸桿菌中，培養(yǎng)基中需加入_____進行鑒別和篩選含有重組質粒（目的基因）的細胞。

Answer 1

【答案】

【1】2

【2】 磷酸基團 五碳糖 G C

【3】目的基因與抗性基因被破壞

【4】 DNA連接 原質粒切割的粘性末端重新連接；目的基因的粘性末端連接而成環(huán)狀；目的基因與切割質粒形成重組質粒

【5】避免切割的外源DNA、質粒的粘性末端自身環(huán)化

【6】抗生素

【解析】

【1】圖一中外源DNA為線性，因每條鏈上含有一個游離的磷酸基團，故外源DNA分子中有2個游離的磷酸基團。

【2】DNA分子的一條多核苷酸鏈中，兩個脫氧核苷酸之間以磷酸基團和五碳糖相連。由題可知，SamⅠ識別的DNA序列只有G和C，故用SmaⅠ限制酶切割外源DNA，切開的是G和C之間相連的鍵。

【3】由圖示可知，SmaⅠ酶切割位點位于抗性基因和目的基因中間，故如果用SmaⅠ酶切割外源DNA和質粒來重組質粒，其結果是目的基因與抗性基因被破壞。

【4】如果使用EcoRⅠ酶切割外源DNA和質粒，將目的基因片段與切割后的質粒混合，加入DNA連接酶，獲得的環(huán)狀DNA可能有原質粒切割的粘性末端重新連接、目的基因的粘性末端連接而成環(huán)狀和目的基因與切割質粒形成重組質粒。

【5】如果使用BamHⅠ和HinRⅢ兩種限制酶同時處理外源DNA和質粒，這樣目的基因的兩端的黏性末端不同，質粒的兩端黏性末端也不同，故比用EcoRⅠ酶切割的優(yōu)點是避免切割的外源DNA、質粒的粘性末端自身環(huán)化。

【6】由于重組質粒上有抗性基因和目的基因，故可通過抗性基因的特性進行篩選，為了鑒定重組質粒是否導入大腸桿菌中，可在培養(yǎng)基中加入抗生素進行鑒別和篩選含有重組質粒（目的基因）的細胞。