下圖是利用工程菌(大腸桿菌)生產(chǎn)人生長激素的實驗流程。所用的pBR322質(zhì)粒含有限制酶pstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ的切點各一個，且三種酶切割形成的末端各不相同，而Ampr表示青霉素抗性基因，Tetr表示四環(huán)素抗性基因。請回答以下相關(guān)問題：

(1)過程①所用到的組織細胞是________________，過程④所用的酶是________。⑤過程常用________溶液處理大腸桿菌。
(2)如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ對圖中質(zhì)粒進行切割，用一種酶、兩種酶和三種酶分別切割時形成的DNA片段種類與用一種酶和兩種酶分別切割時形成的DNA片段種類________(填“相同”或“不同”)。
(3)如果只用限制酶PstⅠ切割目的基因和質(zhì)粒，完成過程④、⑤后(受體大腸桿菌不含Ampr、Tetr質(zhì)粒)，將三角瓶內(nèi)的大腸桿菌先接種到甲培養(yǎng)基上，形成菌落后用無菌牙簽挑取培養(yǎng)基甲上的單個菌落，分別接種到乙和丙兩個培養(yǎng)基的相同位置上，一段時間后，菌落的生長狀況如圖乙、丙所示。接種到甲培養(yǎng)基上的目的是篩選________________的大腸桿菌；接種到培養(yǎng)基乙上的大腸桿菌菌落，能存活的大腸桿菌體內(nèi)導入的是______________________的質(zhì)粒。含有目的基因的大腸桿菌在培養(yǎng)基乙和丙上的生存情況是____________________。
(4)將大腸桿菌培養(yǎng)在含青霉素、四環(huán)素培養(yǎng)基上的過程，屬于基因工程基本操作中的__________________________步驟。

下圖是利用工程菌(大腸桿菌)生產(chǎn)人生長激素的實驗流程。所用的pBR322質(zhì)粒含有限制酶pstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ的切點各一個，且三種酶切割形成的末端各不相同，而Ampr表示青霉素抗性基因，Tetr表示四環(huán)素抗性基因。請回答以下相關(guān)問題：

(1)過程①所用到的組織細胞是________________，過程④所用的酶是________。⑤過程常用________溶液處理大腸桿菌。

(2)如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ對圖中質(zhì)粒進行切割，用一種酶、兩種酶和三種酶分別切割時形成的DNA片段種類與用一種酶和兩種酶分別切割時形成的DNA片段種類________(填“相同”或“不同”)。

(3)如果只用限制酶PstⅠ切割目的基因和質(zhì)粒，完成過程④、⑤后(受體大腸桿菌不含Ampr、Tetr質(zhì)粒)，將三角瓶內(nèi)的大腸桿菌先接種到甲培養(yǎng)基上，形成菌落后用無菌牙簽挑取培養(yǎng)基甲上的單個菌落，分別接種到乙和丙兩個培養(yǎng)基的相同位置上，一段時間后，菌落的生長狀況如圖乙、丙所示。接種到甲培養(yǎng)基上的目的是篩選________________的大腸桿菌；接種到培養(yǎng)基乙上的大腸桿菌菌落，能存活的大腸桿菌體內(nèi)導入的是______________________的質(zhì)粒。含有目的基因的大腸桿菌在培養(yǎng)基乙和丙上的生存情況是____________________。

(4)將大腸桿菌培養(yǎng)在含青霉素、四環(huán)素培養(yǎng)基上的過程，屬于基因工程基本操作中的__________________________步驟。

 

20．如圖是利用工程菌（大腸桿菌）生產(chǎn)人生長激素的實驗流程．所用的pBR322質(zhì)粒含有限制酶pstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ的切點各一個，Amp^r表示青霉素抗性基因，Tet^r表示四環(huán)素抗性基因．請回答以下相關(guān)問題：

（1）過程①所用到的組織細胞是人垂體組織細胞，①過程不能利用人的皮膚細胞，其原因是基因的選擇性表達（或皮膚細胞不能合成生長激素的mRNA）．獲得人的生長激素基因，一般可采用PCR技術(shù)進行擴增，此基因在基因工程中稱為目的基因．
（2）如果從限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ中任選兩種酶對質(zhì)粒進行切割，均會將質(zhì)粒切成兩段，則切割形成的DNA片段共有6種，其中含有完整四環(huán)素抗性基因的DNA片段占$\frac{1}{6}$．
（3）如果只用限制酶PstI切割目的基因和質(zhì)粒，完成過程④、⑤后（受體大腸桿菌不含Ampr、Tetr質(zhì)粒），將三角瓶內(nèi)的大腸桿菌先接種到甲培養(yǎng)基上，形成菌落后用無菌牙簽挑取培養(yǎng)基甲上的單個菌落，分別接種到乙和丙兩個培養(yǎng)基的相同位置上，一段時間后，菌落的生長狀況如圖乙、丙所示．接種到甲培養(yǎng)基上的目的是篩選含含四環(huán)素抗性基因的大腸桿菌；接種到培養(yǎng)基乙上的大腸桿菌菌落，能存活的大腸桿菌在培養(yǎng)基乙和丙上的生存情況是在丙中能存活，在乙中不能存活．
（4）也可將基因表達載體導入胚胎干細胞，形成早期胚胎后，移植入動物體內(nèi)獲得轉(zhuǎn)基因小動物，所用的胚胎干細胞可以從早期胚胎或原始性腺（原始生殖腺）中分離出來．將該細胞培養(yǎng)在添加了抑制因子的培養(yǎng)液中，是為了能夠維持其不分化的狀態(tài)，以保持干細胞的全能性．

9．如圖是利用工程菌（大腸桿菌）生產(chǎn)人生長激素（由人垂體細胞產(chǎn)生的一種蛋白質(zhì)類激素）的實驗流程．所用的 pBR322 質(zhì)粒含有限制酶 pstⅠ、EcoRⅠ和 HindⅢ的切點各一個，且三種酶切割形成的黏性末端各不相同，而 Ampr 表示青霉素抗性基因，Tetr 表示四環(huán)素抗性基因．請據(jù)圖回答以下相關(guān)問題：

（1）人生長激素基因在經(jīng)③處理之前需經(jīng)過 PCR 擴增，擴增前需要人工合成2種引物備用，擴增時應(yīng)在 PCR 擴增儀中加入熱穩(wěn)定DNA聚合酶用以催化互補鏈的合成．
（2）若用限制酶 PstⅠ切割，完成過程④、⑤后，將三角瓶內(nèi)的大腸桿菌先接種到甲培養(yǎng)基上，再將甲培養(yǎng)基上的單個大腸桿菌接種到丙培養(yǎng)基上，待形成12個菌落后，將相應(yīng)菌落的一部分轉(zhuǎn)接到乙培養(yǎng)基的相同位置上．一段時間后，菌落的生長狀況如圖乙、丙所示．將三角瓶內(nèi)的大腸桿菌接種 到甲培養(yǎng)基上的目的是篩選含含四環(huán)素抗性基因基因的大腸桿菌；接種到培養(yǎng)基乙上能存活的是導入含普通質(zhì)粒的大腸桿菌．生產(chǎn)人生長激素的工程菌應(yīng)從丙培養(yǎng)基的菌落中選取，選取的依據(jù)是在丙中能存活，在乙中不能存活．

12．如圖是利用工程菌（大腸桿菌）生產(chǎn)人生長激素（由人垂體細胞產(chǎn)生的一種蛋白質(zhì)類激素）的實驗流程．所用的pBR322質(zhì)粒含有限制酶pasⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ的切點各一個，且三種酶切割形成的黏性末端各不相同，而Amp^r表示青霉素抗性基因，Tet^r表示四環(huán)素抗性基因．請據(jù)圖回答以下相關(guān)問題：

（1）過程①所用細胞是人垂體細胞，過程②所用的原料和酶分別是（四種）脫氧核苷酸、逆轉(zhuǎn)錄（反轉(zhuǎn)錄）酶．
（2）人生長激素基因在經(jīng)③處理之前需經(jīng)過PCR擴增，擴增前需要人工合成2種引物備用，擴增時應(yīng)在PCR擴增儀中加入熱穩(wěn)定DNA聚合酶用以催化互補鏈的合成．
（3）若人生長激素基因兩端具有限制酶pstⅠ識別序列，切割人生長激素基因和pBR322質(zhì)粒時只用限制酶pstⅠ的目的是確保產(chǎn)生相同的黏性末端，切割時斷開的鍵是磷酸二酯鍵．
（4）過程④所用的酶是DNA連接酶；過程⑤應(yīng)選擇對青霉素和四環(huán)素敏感型的大腸桿菌作為受體細胞，為提高轉(zhuǎn)化率，首先用Ca²⁺處理大腸桿菌使其成為感受態(tài)細胞．
（5）若用限制酶PstⅠ切割，完成過程④、⑤后，將三角瓶內(nèi)的大腸桿菌先接種到甲培養(yǎng)基上，再將甲培養(yǎng)基上的單個大腸桿菌接種到丙培養(yǎng)基上，待形成12個菌落后，將相應(yīng)菌落的一部分轉(zhuǎn)接到乙培養(yǎng)基的相同位置上．一段時間后，菌落的生長狀況如圖乙、丙所示．將三角瓶內(nèi)的大腸桿菌接種到甲培養(yǎng)基上的目的是篩選含四環(huán)素抗性基因的大腸桿菌；接種到培養(yǎng)基乙上能存活的是導入含完整的pBR322質(zhì)?；蚝蠥mp^r、Tet^r的質(zhì)粒的大腸桿菌．生產(chǎn)人生長激素的工程菌應(yīng)從丙培養(yǎng)基的菌落中選取，選取的依據(jù)是在丙中能存活，在乙中不能存活．

下圖是利用奶牛乳汁生產(chǎn)人的血清白蛋白的圖解,根據(jù)下圖回答：

（1）被①處理后的分散細胞進行培養(yǎng)，通常要在培養(yǎng)液中添加一定量的        ，此外應(yīng)定期更換培養(yǎng)液，以便保證被培養(yǎng)的細胞處于無菌無毒的環(huán)境中進行培養(yǎng)。
（2）在形成圖中③的過程中,獲取②的途徑主要有從基因文庫中獲取、        、人工合成。
（3）圖中①一般經(jīng)                   處理可以得到③,從③到④的過程中涉及到的生物技術(shù)有             和             。
（4）有人對這種牛奶不敢食用，人們對這種轉(zhuǎn)基因食品的擔心表現(xiàn)在擔心出現(xiàn)      效應(yīng),擔心出現(xiàn)新的         ，擔心營養(yǎng)成分改變。
（5）人的血清白蛋白的生產(chǎn)，說明該工程突破了自然界物種之間的           。

下圖是利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)人胰島素的操作過程示意圖，請據(jù)圖作答。

（1）能否利用人的皮膚細胞來完成①過程？     。
原因是                                                    。
（2）過程②稱為                   。
（3）為使過程⑧更易進行，可用      處理D。
（4）下圖為上圖中質(zhì)粒B的簡圖，小箭頭所指分別為限制性內(nèi)切酶EcoRI、BamHI的酶切位點，amp^R為青霉素抗性基因，tct^R為四環(huán)素抗性基因，P為啟動子，T為終止子，ori為復制原點。已知目的基因的兩端分別有包括EcoRI、BamHI在內(nèi)的多種酶的酶切位點。

①將上述連接產(chǎn)物導入無任何抗藥性的大腸桿菌細胞中然后接種到含青霉素的培養(yǎng)基中，能生長的大腸桿菌所含有的連接產(chǎn)物是                         。（2分，）
②在上述實驗中，為了防止目的基因和質(zhì)粒在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，酶切時應(yīng)選用的酶是                 。
（5）若要使A在體外通過③④⑤過程擴增，那么在此過程中所使用的酶是             。（2分）除酶外還需要加入引物，其作用是                                 。（2分）

下圖是利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)人胰島素的操作過程示意圖，請據(jù)圖作答。

（1）能否利用人的皮膚細胞來完成①過程？     。

原因是                                                    。

（2）過程②稱為                   。

（3）為使過程⑧更易進行，可用      處理D。

（4）下圖為上圖中質(zhì)粒B的簡圖，小箭頭所指分別為限制性內(nèi)切酶EcoRI、BamHI的酶切位點，amp^R為青霉素抗性基因，tct^R為四環(huán)素抗性基因，P為啟動子，T為終止子，ori為復制原點。已知目的基因的兩端分別有包括EcoRI、BamHI在內(nèi)的多種酶的酶切位點。

①將上述連接產(chǎn)物導入無任何抗藥性的大腸桿菌細胞中然后接種到含青霉素的培養(yǎng)基中，能生長的大腸桿菌所含有的連接產(chǎn)物是                         。（2分，）

②在上述實驗中，為了防止目的基因和質(zhì)粒在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，酶切時應(yīng)選用的酶是                 。

（5）若要使A在體外通過③④⑤過程擴增，那么在此過程中所使用的酶是             。（2分）除酶外還需要加入引物，其作用是                                 。（2分）

 

下圖是利用奶牛乳汁生產(chǎn)人的血清白蛋白的圖解,根據(jù)下圖回答：

（1）被①處理后的分散細胞進行培養(yǎng)，通常要在培養(yǎng)液中添加一定量的         ，此外應(yīng)定期更換培養(yǎng)液，以便保證被培養(yǎng)的細胞處于無菌無毒的環(huán)境中進行培養(yǎng)。

（2）在形成圖中③的過程中,獲取②的途徑主要有從基因文庫中獲取、         、人工合成。

（3）圖中①一般經(jīng)                    處理可以得到③,從③到④的過程中涉及到的生物技術(shù)有              和              。

（4）有人對這種牛奶不敢食用，人們對這種轉(zhuǎn)基因食品的擔心表現(xiàn)在擔心出現(xiàn)       效應(yīng),擔心出現(xiàn)新的          ，擔心營養(yǎng)成分改變。

（5）人的血清白蛋白的生產(chǎn)，說明該工程突破了自然界物種之間的            。

 

下圖是利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)人胰島素的操作過程示意圖，請據(jù)圖回答。

   （1）在基因工程操作程序中，圖中①②表示        ，⑦表示       ，⑧表示          ，⑩表示目的基因的檢測與鑒定。不能利用人的唾液腺細胞來完成①過程的原因是          。

   （2）過程②必需的酶是         酶。過程③是DNA受熱             后解鏈為單鏈，③④⑤表示的PCR技術(shù)需要的條件有：模板DNA、四種脫氧核苷酸、          、       、穩(wěn)定的緩沖液和嚴格的溫度控制設(shè)備。

   （3）在利用A和B獲得C的過程中，必須用      切割A(yù)和B，使它們產(chǎn)生             ，再加入          ，才可以形成C。

   （4）基因工程是否成功可以在不同水平層次上進行檢測。在DNA水平上檢測的方法是     。在蛋白質(zhì)水平上進行檢測的方法是從大腸桿菌中提取蛋白質(zhì)，進行             ，觀察是否產(chǎn)生雜交帶。

   （5）為使過程⑧更易進行，可用Ca²⁺處理D，使其成為       細胞。

 

下圖是利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)人胰島素的操作過程示意圖。據(jù)圖作答。

（1）圖中細胞1是        細胞。過程②、④需要的酶分別是                    。
（2）與人細胞中胰島素基因相比，過程②獲得的目的基因不含有非編碼區(qū)和         。
（3）若A中共有a個堿基對，其中鳥嘌呤有b個，則③④⑤過程連續(xù)進行4次，至少需要提供胸腺嘧啶         個。
（4）圖中B的基本組成單位有     種；基因工程的核心步驟是       （填圖中序號）。
（5）便于重組DNA的鑒定和選擇，圖中C的組成必須有             ；為使過程⑧更易進行，可用        處理大腸桿菌。
（6）過程⑨得到使外源基因高效率表達的菌類細胞株系稱為           ；若過程⑨發(fā)生了變異，則此變異為           。過程⑩得到的人胰島素需要體外加工才具有生物活性，原因是大腸桿菌                    。

下圖是利用生物工程技術(shù)生產(chǎn)人生長激素的示意圖。質(zhì)粒上的Amp^r表示青霉素抗性基因，Tet^r表示四環(huán)素抗性基因，限制酶PstI、EcoR I和Hind Ⅲ切割形成的末端均不相同。據(jù)圖回答：

（1）將人生長激素基因?qū)胄∈篌w內(nèi)來生產(chǎn)生長激素。圖中對供體雌鼠甲用促性腺激素處理一段時間后與雄鼠乙交配，然后通過手術(shù)的方法從雌鼠甲的___________中取出受精卵。圖中早期胚胎應(yīng)保證發(fā)育到____________________階段，才能進行后續(xù)過程的操作。
（2）①過程不能利用人的皮膚細胞，其原因是_____________________________。
（3）為了使目的基因和質(zhì)粒定向連接并且有利于受體細胞的篩選，切割質(zhì)粒時應(yīng)選用的酶是                 。
（4）大腸桿菌細胞內(nèi)應(yīng)不含          基因，以利于篩選出含重組質(zhì)粒的受體菌。
（5）如果從限制酶Pst I、EcoR I和HindⅢ任選兩種酶對質(zhì)粒進行切割，均會將質(zhì)粒切成兩段，則形成的DNA片段有________種，其中含有完整四環(huán)素抗性基因的DNA片段占___________。
（6）按照圖示的操作，將三角瓶中的大腸桿菌先接種到甲培養(yǎng)基上，然后分別接種到乙和丙兩個培養(yǎng)基的相同位置，一段時間后，菌落的生長狀況如乙、丙圖所示。據(jù)圖分析丙培養(yǎng)基中含人生長激素基因的菌落有_____個。

)下圖是利用基因工程辦法生產(chǎn)人白細胞干擾素的基本過程圖，據(jù)圖回答：

（1）一般將受體大腸桿菌用＿＿＿＿處理，使細胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)，這種細胞稱為＿＿＿＿＿＿＿＿。

（2）②物質(zhì)是從大腸桿菌分離出的＿＿＿＿。其化學本質(zhì)是＿＿＿＿，它必須能在宿主細胞中＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。

（3）③過程表明目的基因＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。

（4）進行基因工程操作一般要經(jīng)過的四個步驟是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿ 、＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿、＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿、＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。

下圖是利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)人胰島素的操作過程示意圖，請據(jù)圖作答。

（1）能否利用人的皮膚細胞來完成①過程？_________，為什么？_________________。

（2）過程②、③必需的酶分別是__________、__________。

（3）為使過程⑧更易進行，可用__________（藥劑）處理D等。

（4）圖中的B起到運載體的作用，基因工程中，B應(yīng)具備的條件是_________________。

（5）構(gòu)建C需用到的酶______________________________。

（6）獲取目的基因，除人工合成外，還可用____________________方法。

（7）若酶均點為AATT，胰島素基因中無此序列，但其兩端有此序列。質(zhì)粒中有抗青霉素基因（該基因內(nèi)有AATT序列）和抗四環(huán)素基因（不含AATT序號），則將受體細菌先放在含__________素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，然后將能在此培養(yǎng)基上生長的細菌再接種到含__________素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，__________（能／不能）生長的細菌可能含有目的基因。

下圖是利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)人胰島素的操作過程示意圖，請據(jù)圖作答：

(1)能否利用人的皮膚細胞來完成①過程？__________________。為什么？________________________________________________________________________。

(2)過程②③必需的酶分別是______、_______；過程⑥所用的酶是_______；過程⑦所用的酶是_______。

(3)取自大腸桿菌的物質(zhì)B，其名稱是______，在基因工程中起____的作用。B上通常帶有某些標記基因，其作用是________________________________________________。

(4)為使⑧更易進行，可用___________處理D，以增大其通透性。

(5)圖中的B應(yīng)該符合的條件為__________________________________。

能起到B的作用的有_______________________________________________，

圖中的D是基因工程中的_______細胞，能作為這種細胞的有_____________等。

 

下圖是利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)人胰島素的操作過程示意圖，請據(jù)圖回答：

(1)人的胰島素基因能導入大腸桿菌體內(nèi)并表達，原因是_________________________。

(2)②③過程必需的酶分別是____________________________。

(3)③④過程稱為__________，此過程也可在體外利用________技術(shù)進行。

(4)簡述利用A、B獲得C的過程：_____________________________________。

(5)構(gòu)建______(填字母)是基因工程的核心，其目的是_____________________________。完成⑧過程常用________處理細胞